熒光分光光度計(jì)常用的光源是氙燈和鎵砷化鎵（GaAs）。

氙燈是熒光分光光度計(jì)中常見的光源之一。它能夠提供連續(xù)的光譜，波長范圍通常在190nm至900nm之間。氙燈具有高亮度、穩(wěn)定性和長壽命等特點(diǎn)，適用于廣泛的熒光分析應(yīng)用。氙燈的光譜強(qiáng)度與波長有明顯的相關(guān)性，能夠較好地滿足熒光測定的要求。

在某些特殊的應(yīng)用中，鎵砷化鎵（GaAs）也被用作熒光分光光度計(jì)的光源。與氙燈不同，GaAs使用激光二極管（LD）作為激發(fā)源，具有較窄的發(fā)射譜帶。GaAs在波長為780nm到905nm之間提供高亮度的激光光源，可以充分滿足特定波長的熒光分析需求。

熒光測定中需要注意的一些主要問題如下：

1. 選擇合適的溶劑和溶液組成：熒光測定的樣品需要在溶液中進(jìn)行，正確選擇溶劑以及樣品與溶劑的比例非常重要，以確保樣品能夠溶解并得到準(zhǔn)確的測量結(jié)果。
2. 防止內(nèi)部光散射和測量背景：熒光測定中的背景信號可能來自儀器和試劑的自發(fā)發(fā)光，必須通過相應(yīng)的空白試驗(yàn)控制這些背景信號，并進(jìn)行相應(yīng)的背景校正。
3. 消除散射和吸收：散射是熒光測定中非常常見的問題之一，因?yàn)樗鼤蓴_到底物和產(chǎn)物的熒光信號?？梢酝ㄟ^合理調(diào)整測量條件、改變反應(yīng)物濃度和添加吸收劑等方法來消除或減小散射和吸收的影響。
4. 校正熒光光譜的重疊：在多成分分析中，熒光光譜的重疊可能導(dǎo)致測定結(jié)果的誤差。針對這個問題，可以使用多元回歸分析、主成分分析或者最小二乘法進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和解析，以準(zhǔn)確獲得每個組分的濃度。
5. 最佳測量條件的確定：熒光測定的靈敏度和選擇性高度依賴于測量條件的優(yōu)化。例如，調(diào)整激發(fā)光的波長和強(qiáng)度、選擇合適的檢測濾光片、調(diào)整樣品濃度等都可能對測量結(jié)果產(chǎn)生重要影響，因此需要仔細(xì)考慮和優(yōu)化測量條件。
6. 樣品的制備和保存：熒光測定結(jié)果可能會受到樣品制備過程中的溫度、光照和時間等因素的影響。為減小這些影響，應(yīng)該選擇合適的制備方法，并且在分析過程中保持樣品的穩(wěn)定性。
7. 合適的儀器校準(zhǔn)和驗(yàn)證：為確保熒光分光光度計(jì)的準(zhǔn)確性和可靠性，需要對儀器進(jìn)行校準(zhǔn)和驗(yàn)證。這可以通過使用已知熒光強(qiáng)度的參考標(biāo)準(zhǔn)或標(biāo)準(zhǔn)工具進(jìn)行比較和檢驗(yàn)來完成。

總結(jié)起來，熒光分光光度計(jì)常用的光源是氙燈和鎵砷化鎵（GaAs）。在熒光測定中需要注意選擇合適的溶劑和溶液組成、控制背景信號、消除散射和吸收、校正熒光光譜的重疊、確定最佳測量條件、樣品的制備和保存以及儀器校準(zhǔn)和驗(yàn)證等主要問題。